Продукты

Серин/треониновые протеинфосфатазы были описаны во многих патогенных бактериях как важные ферменты, участвующие в зависимых от фосфорилирования путях передачи сигнала и часто связанные с вирулентностью этих организмов.Проверка генома Mycoplasma synoviae выявила наличие гена (prpC), кодирующего предполагаемую протеинфосфатазу подсемейства протеинфосфатаз 2C (PP2C).Здесь мы сообщаем о полной биохимической характеристике фосфатазы M. synoviae (PrpC) и особой роли ионов металлов в структурно-функциональных отношениях этого фермента.Анализ аминокислотной последовательности PrpC показал, что все остатки, участвующие в биядерном металлическом центре, и предполагаемые остатки, координирующие третий ион металла, консервативные в фосфатазах PP2C, присутствуют в PrpC.PrpC представляет собой мономерный белок, способный дефосфорилировать фосфо-субстраты с зависимостью от ионов Mn(2+).Анализ термостабильности показал стабильность фермента при умеренных температурах и влияние ионов Mn(2+) на это свойство.Масс-спектрометрический анализ показал, что три иона металла связываются с PrpC, два из которых имеют высокую константу сродства.Мутационный анализ предполагаемых остатков, координирующих третий металл, Asp122 и Arg164, показал, что эти варианты демонстрируют более слабое связывание ионов марганца и что обе мутации влияют на активность фосфатазы PrpC.Согласно этим результатам, PrpC является членом металлозависимой протеинфосфатазы с улучшенной стабильностью в голоформе и с Asp122, возможно, вовлеченным в третий сайт связывания металла, необходимый для каталитической активности.