Продукты

Кристаллические структуры комплексов карбоксипептидазы Т (CpT) с аналогами субстрата фенилаланина и аргинина - бензилянтарной кислотой и (2-гуанидиноэтилмеркапто)янтарной кислотой - определяли методом молекулярного замещения при разрешениях 1,57 Å и 1,62 Å для уточнения широкого профиля субстратной специфичности. фермента.Было показано, что консервативные остатки Leu211 и Leu254 (также присутствующие как в карбоксипептидазе A, так и в карбоксипептидазе B) являются структурными детерминантами для распознавания гидрофобных субстратов, тогда как Asp263 предназначен для распознавания положительно заряженных субстратов.Мутации этих детерминант модифицируют субстратный профиль: CpT-вариант Leu211Gln приобретает карбоксипептидазо-В-подобные свойства, а CpT-вариант Asp263Asn — карбоксипептидазо-А-подобную селективность.Было показано, что петля Pro248-Asp258, взаимодействующая с Leu254 и Tyr255, отвечает за узнавание С-концевого остатка субстрата.Связывание субстрата в S1'-субсайте приводит к лиганд-зависимому сдвигу этой петли, а перемещение боковой цепи Leu254 индуцирует конформационную перестройку остатка Glu277, решающего для катализа.Это новое понимание субстратной селективности металлокарбоксипептидаз, демонстрирующее важность взаимодействия между S1'-субсайтом и каталитическим центром.