Продукты

Подобно другим РНК-вирусам с положительной цепью, томбусвирусы реплицируются мембраносвязанным комплексом вирусной репликазы (VRC).VRC состоит из кодируемой вирусом p92 РНК-зависимой РНК-полимеразы (RdRp), вирусного РНК-шаперона p33 и нескольких кооптированных белков-хозяев.Чтобы стать функциональным RdRp после его трансляции, белок репликации p92 должен быть включен в VRC с последующей его активацией.Ранее мы показали в анализе на основе бесклеточного дрожжевого экстракта, что для активации RdRp вируса кустистости томатов (TBSV) требуется растворимый(е) фактор(ы) хозяина.В этой статье мы идентифицируем клеточный белок теплового шока 70 (Hsp70) как кооптированный фактор хозяина, необходимый для активации укороченного на N-конце рекомбинантного TBSV RdRp.Кроме того, блокирование функции Hsp70 на основе малых молекул ингибирует синтез РНК tombusvirus RdRp in vitro.Кроме того, мы показываем, что нейтральные фосфолипиды, а именно фосфатидилэтаноламин (ФЭ) и фосфатидилхолин (ФХ), усиливают активацию RdRp in vitro.Напротив, фосфатидилглицерин (PG) проявляет сильный и доминирующий ингибирующий эффект на активацию RdRp in vitro.Мы также демонстрируем, что PE и PC стимулируют взаимодействие RdRp-вирусной плюс-цепи РНК [(+) РНК], в то время как PG ингибирует связывание вирусной РНК с RdRp.Основываясь на стимулирующей и ингибирующей роли различных фосфолипидов в активации RdRp томбусвируса, мы предполагаем, что липидный состав целевых субклеточных мембран может использоваться томбусвирусами для регуляции сборки новых VRC в ходе инфекции. Кодируемая вирусом РНК-зависимая РНК-полимераза (RdRp), который отвечает за синтез потомства вирусной РНК в инфицированных клетках нескольких РНК-вирусов с положительной цепью, изначально неактивен.Эта стратегия, вероятно, позволит избежать синтеза вирусной РНК в цитозоле, что быстро приведет к индукции РНК-запускаемых клеточных противовирусных ответов.Во время сборки мембраносвязанного репликазного комплекса вирусный RdRp активируется посредством не до конца изученного процесса, который делает RdRp способным к синтезу РНК.Используя TBSV RdRp, мы показываем, что кооптированный клеточный шаперон Hsp70 и нейтральные фосфолипиды облегчают активацию RdRp in vitro.Напротив, фосфатидилглицерин (PG) оказывает доминирующее ингибирующее действие на активацию RdRp in vitro и взаимодействие RdRp с вирусной РНК, что указывает на то, что мембранный микродомен, окружающий RdRp, сильно влияет на его способность к синтезу РНК.Таким образом, активация вирусного RdRp, вероятно, зависит от множества компонентов-хозяев в инфицированных клетках.