Продукты

Хотя этиология дегенерации межпозвоночных дисков плохо изучена, одним из подходов к предотвращению этого процесса может быть ингибирование апоптоза.В текущем исследовании изучались антиапоптотические эффекты карбоксиметилированного хитозана (CMCS) в клетках студенистого ядра (NP) с целью повышения выживаемости клеток диска.Клетки NP крысы выделяли и культивировали in vitro, а перекись водорода (H2O2) использовали для построения модели апоптоза клеток NP.Жизнеспособность клеток оценивали с помощью набора для подсчета клеток-8.Соотношение апоптотических клеток исследовали с помощью анализа двойного окрашивания аннексином V-флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) и йодидом пропидия (PI), а морфологию наблюдали с помощью окрашивания Hoechst 33342.Потенциал митохондриальной мембраны клеток NP оценивали с помощью флуоресцентного окрашивания родамином 123.Для измерения уровней мРНК индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS), каспазы-3, В-клеточной лимфомы (Bcl)-2, коллагена II типа и аггрекана была проведена обратная транскрипция (ОТ) — количественная полимеразная цепная реакция (кПЦР).Для определения уровней белка iNOS и Bcl-2 был проведен вестерн-блот-анализ.Результаты окрашивания аннексином V-FITC/PI и Hoechst 33342 показали, что CMCS способен предотвращать апоптоз клеток NP дозозависимым образом.Окрашивание родамином 123 показало, что CMCS уменьшает нарушение потенциала митохондриальной мембраны в клетках NP, обработанных H2O2.Сниженная активность каспазы-3 и повышенная активность Bcl-2 были обнаружены в клетках NP, обработанных CMCS, с помощью RT-qPCR и вестерн-блоттинга.CMCS также способствовал пролиферации и секреции коллагена II типа и аггрекана в обработанных H2O2 клетках NP.Было показано, что CMCS эффективен в предотвращении апоптотической гибели клеток in vitro, демонстрируя потенциальные преимущества этого терапевтического подхода в регуляции дегенерации диска.