Продукты

Улучшение использования азота в животноводстве важно для обеспечения устойчивого производства крупного рогатого скота.Поскольку пурины и пиримидины (РР) составляют значительную часть азота рубца, важно лучше понять абсорбцию и промежуточный метаболизм РР.В настоящей работе описана разработка и валидация чувствительного и специфичного метода одновременного определения 20 пуринов (аденин, гуанин, гуанозин, инозин, 2'-дезоксигуанозин, 2'-дезоксиинозин, ксантин, гипоксантин), пиримидинов (цитозин, тимин, урацил, цитидин, уридин, тимидин, 2'-дезоксиуридин) и продукты их деградации (мочевая кислота, аллантоин, β-аланин, β-уреидопропионовая кислота, β-аминоизомасляная кислота) в плазме крови молочных коров.Методика на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией с ионизацией электрораспылением (ЖХ-МС/МС) была объединена с индивидуальными калибровочными стандартами, согласованными с матрицей, и эталонными соединениями, меченными стабильными изотопами.Количественному анализу предшествовала новая процедура предварительной обработки, состоящая из осаждения этанолом, фильтрации, выпаривания и восстановления.Были исследованы параметры разделения и обнаружения во время анализа ЖХ-МС/МС.Было подтверждено, что использование модели логарифмической калибровки, а не модели линейной калибровки, привело к более низкому CV%, а отсутствие теста на соответствие продемонстрировало удовлетворительную линейную регрессию.Метод охватывает диапазоны концентраций каждого метаболита в соответствии с таковыми в реальных образцах, например, гуанин: 0,10–5,0 мкмоль/л и аллантоин: 120–500 мкмоль/л.CV% для выбранных диапазонов количественного определения был ниже 25%.Метод имеет хорошую воспроизводимость (CV%≤25%), промежуточную точность (CV%≤25%) и отличное извлечение (91-107%).Все метаболиты продемонстрировали хорошую долговременную стабильность и хорошую стабильность в циклах (CV%≤10%).Различная степень абсолютного матричного эффекта наблюдалась в плазме, моче и молоке.Определение относительных матричных эффектов показало, что метод подходит почти для всех исследованных метаболитов ПП в плазме, взятой из артерии и портальной печеночной, печеночной и желудочно-селезеночной вен, и, за некоторыми исключениями, также для других видов, таких как курица, свинья, норка, человек и крыса.