Продукты

Влияние детергентов на активность атпазы Р-гликопротеина: различия в нарушениях базальной и верапамилзависимой активности.

P-гликопротеин (P-gp), гликопротеин плазматической мембраны, связанный с фенотипом множественной лекарственной устойчивости, отвечает за АТФ-зависимый отток различных амфифильных препаратов.Используя мембранные везикулы, полученные из клеточной линии с множественной лекарственной устойчивостью DC-3F/ADX, мы изучили возмущение базальной (т.е. в отсутствие лекарственного средства) и верапамил-зависимой активности P-gp-АТФазы, индуцированное различными детергентами, при нерастворимых, а также при солюбилизирующих, концентрациях.Прогрессирующую солюбилизацию мембраны с увеличением концентрации детергента контролировали с помощью экспериментов по светорассеянию и центрифугированию.Для нерастворимых концентраций детергента все протестированные детергенты, кроме DOC, вызывали частичное ингибирование активности P-gp-АТФазы, что не коррелировало с количеством различных тестируемых детергентов, включенных в мембраны.Анализ индуцированной верапамилом активации P-gp показывает, что активность АТФазы P-gp по-разному модулируется различными детергентами в нерастворяющих концентрациях.Таким образом, более вероятны специфические взаимодействия между P-gp и детергентами, чем глобальное возмущение мембраны.После солюбилизации различными протестированными детергентами базальная активность P-gp-АТФазы практически полностью ингибировалась, за исключением присутствия CHAPS, который был способен сохранять эту активность на уровне, сравнимом с уровнем, измеренным в нативных мембранах.Однако индуцированная верапамилом активация P-gp АТФазы была потеряна во время солюбилизации P-gp с помощью CHAPS, но восстановилась после разбавления CHAPS ниже его критической мицеллярной концентрации.Эти наблюдения указывают на специфические взаимодействия между молекулами P-gp и CHAPS внутри смешанных мицелл.В целом наши данные, свидетельствующие о специфических взаимодействиях P-gp/детергенты, согласуются с расположением сайтов транспорта лекарств на трансмембранных доменах P-gp.