Продукты

Окислительное повреждение оснований ДНК обычно приводит к образованию окисленных пуринов, особенно 7,8-дигидро-8-оксогуанина (8-oxoG) и 7,8-дигидро-8-оксоаденина (8-oxoA). известное мутагенное поражение.Поскольку 8-oxoG легко подвергается дальнейшему окислению по сравнению с нормальными основаниями, вставку основания во время синтеза ДНК напротив окисленной формы 8-oxoG исследовали in vitro.Синтетическая матрица, содержащая одно повреждение 8-oxoG, сначала обрабатывалась различными одноэлектронными оксидантами или в условиях синглетного кислорода, а затем подвергалась удлинению праймера, катализируемому фрагментом Кленова экзо- (Kf экзо-), ДНК-полимеразой тимуса теленка альфа (pol alpha ) или ДНК-полимеразы человека бета (pol бета).В соответствии с предыдущими сообщениями, dAMP и dCMP избирательно вставляются напротив 8-oxoG всеми тремя ДНК-полимеразами.Интересно, что окисление 8-oxoG, как было обнаружено, индуцирует вставку dAMP и dGMP напротив повреждения Kf exo- с временным ингибированием удлинения праймера, происходящим в месте модифицированного основания.Кроме того, поражение представляет собой блок во время синтеза ДНК pol альфа и pol бета.Эксперименты с 8-oxoA-модифицированным матричным олигонуклеотидом показывают, что как 8-oxoA, так и окисленная форма 8-oxoA направляют вставку dTMP посредством Kf exo-.Масс-спектрометрический анализ 8-oxoG-содержащих олигонуклеотидов до и после окисления IrCl62 согласуется с окислением в первую очередь сайта 8-oxoG, что приводит к образованию гуанидиногидантоинового фрагмента в качестве основного продукта.Доказательств образования абазитовых участков получено не было.Эти результаты демонстрируют, что окисленная форма 8-oxoG, возможно, гуанидиногидантоин, может направлять неправильное прочтение и неправильную вставку dNTP во время синтеза ДНК.Если бы такой процесс происходил in vivo, то он представлял бы собой точечное мутагенное повреждение, приводящее к трансверсиям G-->T и G-->C.Однако соответствующая окисленная форма 8-oxoA в первую очередь показывает правильную вставку T во время синтеза ДНК с Kf exo-.