Продукты

Бета-D-2'-дезокси-2'-фтор-2'-C-метилцитидин (PSI-6130) является мощным специфическим ингибитором синтеза РНК вируса гепатита С (HCV) в клетках репликона Huh-7.Чтобы ингибировать РНК-полимеразу NS5B HCV, PSI-6130 должен быть фосфорилирован до 5'-трифосфатной формы.Исследовали фосфорилирование PSI-6130 и ингибирование NS5B HCV.Фосфорилирование PSI-6130 рекомбинантной человеческой 2'-дезоксицитидинкиназой (dCK) и уридин-цитидинкиназой 1 (UCK-1) измеряли с помощью сопряженной спектрофотометрической реакции.Было показано, что PSI-6130 является субстратом для очищенной dCK с Km 81 мкМ и kcat 0,007 с-1, но не является субстратом для UCK-1.Монофосфат PSI-6130 (PSI-6130-MP) был эффективно фосфорилирован до дифосфата, а затем до трифосфата с помощью рекомбинантной UMP-CMP-киназы человека и нуклеозиддифосфаткиназы соответственно.Изучено ингибирование РНК-полимераз NS5B вируса гепатита С дикого типа и мутантной (S282T).Стационарная константа ингибирования (Ki) трифосфата PSI-61 30 (PSI-6130-TP) с ферментом дикого типа составляла 4,3 мкМ.Аналогичные результаты были получены с 2'-C-метиладенозинтрифосфатом (Ki=1,5 мкМ) и 2'-C-метилцитидинтрифосфатом (Ki=1,6 мкМ).NS5B с мутацией S282T, которая, как известно, придает устойчивость к 2'-C-метиладенозину, ингибировалась PSI-6130-TP так же эффективно, как и дикий тип.Включение PSI-6130-MP в РНК, катализируемое очищенной РНК-полимеразой NS5B, приводило к обрыву цепи.