Продукты

Белок ORF45 вируса герпеса, ассоциированного с саркомой Капоши (KSHV), представляет собой специфичный для гамма-герпесвируса белок непосредственно-раннего тегумента.Наши предыдущие исследования выявили его решающую роль как на ранних, так и на поздних стадиях инфекции KSHV.В этом исследовании мы рассмотрели интерактом ORF45 с использованием панели моноклональных антител.В дополнение к ранее идентифицированным белкам внеклеточной регулируемой киназы (ERK) и рибосомной киназы S6 p90 (RSK) мы обнаружили несколько других коочищенных белков, в том числе известные белки размером ~38 кДа и ~130 кДа.Масс-спектрометрия показала, что белок массой 38 кДа представляет собой вирусную ORF33, а белок массой 130 кДа представляет собой клеточный USP7 (убиквитин-специфическая протеаза 7).Мы сопоставили ORF33-связывающий домен с высококонсервативными карбоксиконцевыми 19 аминокислотами (aa) ORF45, а USP7-связывающий домен с известным консенсусным мотивом в центральной области ORF45.С помощью иммунофлуоресцентного окрашивания мы наблюдали колокализацию ORF45 с ORF33 или USP7 как в условиях трансфекции, так и в клетках, инфицированных KSHV.Более того, мы заметили ORF45-зависимую релокализацию части ORF33/USP7 из ядра в цитоплазму.Мы обнаружили, что ORF45 вызывала увеличение накопления белка ORF33, которое исчезало, если в ORF45 удалялся либо ORF33-, либо USP7-связывающий домен.Кроме того, делеция консервативного карбоксильного конца ORF45 в геноме KSHV резко снижает уровень белка ORF33 в клетках, инфицированных KSHV, и прекращает образование потомства вирионов.В совокупности наши результаты не только выявляют новые компоненты интерактома ORF45, но также демонстрируют, что взаимодействия между этими белками имеют решающее значение для литической репликации KSHV. Вирус герпеса, ассоциированный с саркомой Капоши (KSHV), является возбудителем нескольких видов рака человека.ORF45 KSHV является многофункциональным белком, который необходим для литической репликации KSHV, но точные механизмы, с помощью которых ORF45 выполняет свои критические функции, неясны.Наши предыдущие исследования показали, что весь белок ORF45 в клетках существует в высокомолекулярных комплексах.Поэтому мы стремились охарактеризовать интерактом ORF45, чтобы получить представление о его роли во время литической репликации.Используя панель моноклональных антител, мы исследовали интерактом ORF45 в клетках, инфицированных KSHV.Мы идентифицировали двух новых партнеров по связыванию ORF45: вирусный белок ORF33 и клеточную убиквитин-специфическую протеазу 7 (USP7).Мы также демонстрируем, что взаимодействие между ORF45 и ORF33 имеет решающее значение для эффективного производства вирусных частиц KSHV, предполагая, что целенаправленное вмешательство в это взаимодействие может представлять собой новую стратегию для ингибирования литической репликации KSHV.