Продукты

X-gal (также сокращенно BCIG для 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозида) представляет собой органическое соединение, состоящее из галактозы, связанной с замещенным индолом.Соединение было синтезировано Джеромом Хорвицем и его сотрудниками в 1964 году. Формальное химическое название часто сокращается до менее точных, но и менее громоздких фраз, таких как бромхлориндоксилгалактозид.X от индоксила может быть источником X в сокращении X-gal.X-gal часто используется в молекулярной биологии для проверки наличия фермента β-галактозидазы вместо его обычной мишени, β-галактозида.Он также используется для определения активности этого фермента в гистохимии и бактериологии.X-gal является одним из многих индоксилгликозидов и сложных эфиров, которые дают нерастворимые синие соединения, подобные красителю индиго, в результате катализируемого ферментами гидролиза.

X-gal является аналогом лактозы и поэтому может гидролизоваться ферментом β-галактозидазой, расщепляющим β-гликозидную связь в D-лактозе.X-gal при расщеплении β-галактозидазой дает галактозу и 5-бром-4-хлор-3-гидроксииндол-1. Последний затем спонтанно димеризуется и окисляется в 5,5'-дибром-4,4'-дихлор. -индиго-2, продукт интенсивного синего цвета, нерастворимый.X-gal сам по себе бесцветен, поэтому присутствие продукта синего цвета можно использовать в качестве теста на наличие активной β-галактозидазы.Это также позволяет использовать бактериальную β-галактозидазу (так называемую lacZ) в качестве репортера в различных приложениях.

В двухгибридном анализе β-галактозидаза может использоваться в качестве репортера для идентификации белков, которые взаимодействуют друг с другом.В этом методе геномные библиотеки могут быть проверены на взаимодействие с белками с использованием дрожжевой или бактериальной системы.Там, где происходит успешное взаимодействие между скринируемыми белками, это приводит к связыванию активационного домена с промотором.Таким образом, если промотор связан с геном lacZ, продукция β-галактозидазы, которая приводит к образованию колоний с голубым пигментом в присутствии X-gal, будет указывать на успешное взаимодействие между белками.Этот метод может быть ограничен скринингом библиотек размером менее примерно 106. Успешное расщепление X-gal также создает заметно неприятный запах из-за улетучивания индола.

Поскольку X-gal сама по себе бесцветна, наличие продукта синего цвета можно использовать в качестве теста на наличие активной β-галактозидазы.

Эта простая идентификация активного фермента позволяет использовать ген β-галактозидазы (ген lacZ) в качестве репортерного гена в различных приложениях.