Продукты

1. Исследовать, может ли аденозин, полученный из аденозиндифосфата (АДФ), ингибировать агрегацию тромбоцитов, особенно в присутствии антагониста P2Y₁₂, где можно было бы предотвратить эффекты АДФ на рецептор P2Y₁₂. Агрегацию тромбоцитов измеряли в ответ на активатор рецептора тромбина. пептида путем подсчета тромбоцитов в обогащенной тромбоцитами плазме (PRP) и цельной крови в присутствии АДФ и антагонистов P2Y1₂ кангрелора, активного метаболита прасугрела и тикагрелора.В присутствии антагониста P2Y1₂ предварительная инкубация PRP с АДФ ингибировала агрегацию;этот эффект устранялся аденозиндезаминазой.В цельной крови ингибирования агрегации не наблюдалось, за исключением случаев добавления дипиридамола для ингибирования захвата аденозина эритроцитами.Эффекты АДФ в PRP и цельной крови были воспроизведены с использованием аденозина и были непосредственно связаны с изменениями цАМФ (оценивались по стимулированному вазодилататорами фосфорилированию фосфопротеинов).Все результаты были одинаковыми независимо от используемого антагониста P2Y12. АДФ ингибирует агрегацию тромбоцитов в присутствии антагониста P2Y12 посредством превращения в аденозин.Ингибирование происходит в PRP, но не в цельной крови, за исключением случаев, когда ингибируется захват аденозина.Ни один из изученных антагонистов P2Y₁₂ не воспроизвел эффекты дипиридамола в проведенных экспериментах.

2. АДФ считается слабым агонистом тромбоцитов из-за ограниченной реакции агрегации, которую он индуцирует in vitro при физиологических концентрациях внеклеточного Ca(2+) [(Ca(2+) )(o) ].Снижение [Ca(2+)](o) парадоксальным образом усиливает агрегацию, вызванную АДФ, эффект, который связывают с повышенной продукцией тромбоксана A(2).В этом исследовании изучалась роль эктонуклеотидаз в [Ca(2+)](o)-зависимости активации тромбоцитов.Снижение [Ca(2+)](o) с миллимолярного до микромолярного уровня превращало вызванную АДФ (10 мкмоль/л) агрегацию тромбоцитов из временной в устойчивую реакцию как в богатой тромбоцитами плазме, так и в отмытых суспензиях.Блокирование образования тромбоксана А(2) аспирином не влияло на эту [Ca(2+)](o)-зависимость.Предотвращение деградации АДФ устранило разницу между низким и физиологическим [Ca(2+)](o), что привело к надежной и устойчивой агрегации в обоих условиях.Измерения внеклеточного АДФ выявили сниженную деградацию как в плазме, так и в содержащем апиразу солевом растворе при микромолярном уровне по сравнению с миллимолярным [Ca(2+)](o).Как сообщалось ранее, образование тромбоксана A(2) усиливалось при низком [Ca(2+) ](o) , однако это не зависело от активности эктонуклеотидазы (.) Антагонисты рецепторов P2Y кангрелор и MRS2179 продемонстрировали необходимость рецепторов P2Y(12) для устойчивой агрегации, вызванной АДФ, с второстепенной ролью для P2Y(1).В заключение, Са(2+)-зависимая активность эктонуклеотидазы является основным фактором, определяющим степень агрегации тромбоцитов с АДФ, и ее необходимо контролировать в исследованиях активации рецептора P2Y.