Продукты

Моногалактопиранозиды флуоресцеина и метилового эфира флуоресцеина: синтез, ферментативный гидролиз биотинилированной β-галактозидазой и определение коэффициента поступательной диффузии

Моногликозиды флуоресцеина (d-галактопиранозид (FMG) и d-глюкопиранозид) и их метиловый эфир (MFMG) были получены из ацетобромглюкозы/галактозы и метилового эфира флуоресцеина с хорошими выходами.Были проведены эксперименты по ферментативному гидролизу (с использованием биотинилированной β-галактозидазы) галактопроизводных и рассчитаны кинетические параметры.При гидролизе наблюдается увеличение интенсивности флуоресценции в 15–20 раз.Линейное увеличение флуоресценции было отмечено за короткое время и при низкой концентрации субстрата, что делает эти соединения полезными и чувствительными зондами для галактозидаз.Величина значения константы Михаэлиса-Ментен (Km) для MFMG выше, чем у FMG, что свидетельствует о возможном конформационном изменении флуорогенного субстрата.Значение Km для биотинилированной β-Gal с FMG ниже, чем для нативного фермента.Это наблюдение указывает на более высокое сродство биотинилированного фермента к субстрату по сравнению с нативным ферментом.Коэффициенты поступательной диффузии были измерены как для флуорогенных субстратов, так и для обоих продуктов с использованием флуоресцентной корреляционной спектроскопии.Было измерено, что коэффициенты поступательной диффузии для флуорогенных субстратов и продуктов ферментативного гидролиза близки и находятся в диапазоне 3,5–4,5 × 10–10 м2 с–1.Таким образом, усиление или замедление ферментативной кинетики из-за разницы в трансляционной подвижности субстрата и продукта не столь очевидно.