Продукты

1. Методы профилирования метаболитов являются важными инструментами для измерения пулов метаболитов в биологических системах.В то время как большинство методов профилирования метаболитов сообщают об относительной интенсивности или зависят от нескольких внутренних стандартов, представляющих все метаболиты, основным требованием для количественного описания пула метаболитов в биологических клетках и жидкостях является определение абсолютной концентрации.Мы сообщаем здесь о высокопроизводительном и чувствительном методе целевого профилирования метаболитов с помощью газовой хроматографии / тандемной масс-спектрометрии (ГХ / МС / МС), позволяющего проводить абсолютную количественную оценку всех обнаруженных метаболитов.Метод основан на дериватизации метилхлорформиатом и количественном определении путем добавления в образцы стандартов метаболитов, отдельно дериватизированных дейтерированными реагентами для дериватизации.Традиционная ионизация электронным ударом заменяется положительной химической ионизацией, поскольку последняя в значительно большей степени сохраняет молекулярный ион и другие высокомолекулярные фрагменты.Это упростило выбор уникальных переходов МС/МС среди множества совместно элюирующихся метаболитов.В настоящее время новый метод ГХ/МС/МС включает 67 распространенных первичных метаболитов, большинство из которых относится к группам амино- и неаминоорганических кислот.Мы показываем применимость метода на образцах мочи и сыворотки.Этот метод представляет собой значительное усовершенствование существующей методологии количественного анализа профилей метаболитов аминокислот и неаминоорганических кислот с помощью ГХ/МС.

2,24S-гидроксихолестерин (24OHC) и 27-гидроксихолестерин (27OHC) представляют собой два структурно сходных оксистерола разного происхождения: первый образуется почти исключительно в головном мозге, а второй образуется в мозге в меньшей степени, чем в большинстве других органов.ГИПОТЕЗА, ПОДЛЕЖАЩАЯ ПРОВЕРКЕ: Повреждение нейронов и/или демиелинизация вызывают повышенный поток 24OHC из головного мозга в спинномозговую жидкость (ликвор), тогда как дефект гематоэнцефалического барьера вызывает повышенный поток 27OHC из кровотока в спинномозговую жидкость. Для анализа двух оксистеролов в спинномозговой жидкости и плазме более чем 250 пациентов с различными неврологическими и гериатрическими заболеваниями была использована спектрометрия. Различные заболевания в гораздо большей степени влияли на уровни двух оксистеролов в спинномозговой жидкости, чем на уровни в плазме.У пациентов с активными демиелинизирующими заболеваниями в спинномозговой жидкости было повышено содержание 24-ГХ с относительно высоким соотношением 24-ГХ/27-ГХ.Пациенты с менингитом в целом имели высокие уровни обоих стероидов с низким соотношением 24OHC/27OHC.У пациентов с болезнью Альцгеймера уровень 24OHC в спинномозговой жидкости был несколько повышен, а 27OHC — в меньшей степени.Пациенты с рассеянным склерозом имели тенденцию к более высоким уровням 24OHC в активные периоды с высоким соотношением 24OHC/27OHC. Измерения двух оксистеролов в спинномозговой жидкости и плазме могут значительно расширить существующие биохимические методы оценки неврологических заболеваний.