Продукты

Дифференцировка орбитальных фибробластов в зрелые адипоциты и последующее накопление жировой ткани было показано при прогрессировании офтальмопатии Грейвса (ГО).Аутофагия участвует в адипогенезе, но мало что известно о роли аутофагии в инициации и прогрессировании ЯО.Целью данного исследования является изучение роли аутофагии в патогенезе ЯО. Были проанализированы эксплантаты орбитальной жировой/соединительной ткани от пациентов с ЯО и здоровых людей, а также изолированные орбитальные фибробласты.Адипогенез индуцировали с использованием дифференцирующей среды с перекисью водорода или без нее, а аутофагию манипулировали с помощью бафиломицина A1 и короткой шпилечной РНК, нацеленной на Atg5 (shRNA).Аутофагосомы идентифицировали с помощью электронной микроскопии.Экспрессию генов, связанных с аутофагией, и факторов транскрипции, связанных с адипогенезом, анализировали с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени и/или вестерн-блоттинга.Накопление капель липидов исследовали с помощью окрашивания Oil Red O. Аутофагические вакуоли были более многочисленны в клетках GO, чем в клетках, не являющихся GO (p<0,05).Экспрессия генов, связанных с аутофагией, была значительно выше в тканях и клетках ГО, чем в их аналогах, не являющихся ГО, соответственно.Интерлейкин-1β увеличивал содержание белка LC3-II, p62 и Atg7 в клетках GO.Накопление аутофагосом проявлялось на 4-й день адипогенеза и уменьшалось к 10-му дню вместе с образованием липидных капель.Экспрессия белков LC3 и p62 увеличивалась в течение 48 часов после дифференцировки и постепенно снижалась с 4-го по 10-й день. Обработка бафиломицином А1 и нокдаун Atg5 с помощью кшРНК ингибировали накопление липидных капель и подавляли экспрессию адипогенных маркеров. Аутофагия увеличивалась в тканях и клетках GO по сравнению с ткани и клетки, не являющиеся GO, что позволяет предположить, что аутофагия играет роль в патогенезе GO.Манипуляции с аутофагией могут быть терапевтической мишенью для GO.